一、仪器介绍
美国应用生物系统公司自1996年推出全世界首台荧光定量PCR仪之后,不断发展实时定量的技术,使得它的功能更强大,结果更可靠,用途更多样。
ABI Prism 7000型荧光定量PCR仪将这些优点融为一体,使之完全满足基础实验和医学研究的要求。
二、性能特点
高度的实用性
ABI Prism® 7000型荧光定量PCR仪操作更快捷、更方便
● 多色荧光检测
● 实时数据监控
● 熔解曲线实时显示分析
● 简化的等位基因型判定(用于 SNPs分析)
● 阴性/阳性结果自动判定
● 节省空间的设计
突出的精确度和准确度
7000型荧光定量PCR仪采用精确的光学原理和复杂的多组分算法,可准确地检测和处理PCR指数级扩增的数据,得出高精度高重现性的Ct值(Ct值与起始拷贝数有线性关系)。
性能可靠
7000型荧光定量PCR仪的装机指标:使用TaqMan®的RNase P仪器检测板,7000型荧光定量PCR仪能够区分5,000和10,000的模板拷贝数的差异,其置信度可达99.7%
多色荧光检测系统
在反应过程中,7000型序列检测系统的96个样本孔被卤钨灯激发,产生的荧光通过光学滤镜到达CCD照相机,通过过滤轮能够有效地分辨包括FAM™/SYBR® Green I, VIC™/JOE™, TAMRA™,和ROX™在内的多种荧光染料。多色荧光检测技术可实现多重定量、SNPs基因型分型和带有内部阳性对照的阴/阳性分析成为可能。
两种可选的化学试剂
ABI Prism® 7000型序列检测系统兼容两种化学试剂:
● 采用TaqMan®探针的5'核酸酶检测方法可以提供优越的灵敏度和特异性,并且能实现多重反应。
● 对于靶基因鉴定或少量反应时,SYBR® Green I 染料是一种理想的化学试剂。
无需优化的反应设计
不管你选择何种化学试剂,7000型荧光定量PCR仪的分析指导方针能有效节省时间,并提供可靠的结果。不同靶基因无需分别优化扩增体系和参数,分析指导的基本组件包括:
● Primer Express®软件提供自动的引物和探针设计
● TaqMan®和SYBR® Green I Master Mixes简化PCR加样
● 多种温度循环参数使你能在同一个样品板中进行不同的样品检测
● 缺省的引物和探针浓度设定无需分析优化7000型荧光定量PCR仪的多种应用
绝对定量
三、样品
DNA或RNA
四、应用
绝对定量
通过测量样本的Ct值和采用标准曲线,可定量分析未知样品的起始拷贝数。标准曲线是通过计算稀释的已知拷贝数样本的Ct值而得出的。
相对定量
相对定量分析通过一个标准样本来计算表达水平,而不是使用标准曲线。使用内源性的对照来校正样品的加样量。
高分辨的SNP检测
7000型荧光定量PCR仪还能利用多色荧光检测单核苷酸多态性(SNPs)。
阴/阳性分析(终点分析) 使用内部阳性对照(IPC),7000型荧光定量PCR仪可进行阴/阳性分析。由于每个待检测样品中都加入阳性对照品,
可以有效防止假阴性的结果。