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岛津 PPSQ -21A 蛋白测序仪

一、仪器介绍

        自著名的 Edman 降解技术成功从 N 末端开始测定蛋白质序列以来，蛋白质的结构分析有了重大进展。岛津 PPSQ -21A 蛋白测序仪（Protein Sequencer）能够适于多种方法制备的样品。可进行 Pmol 水平的氨基酸序列分析。 LC 分析采用恒溶剂成分洗脱方式，氨基酸的鉴定、装置维护简便易行。配备有助于决定序列的推断软件。标准循环时间约 46.5 分钟。
         Edman 降解技术：蛋白质和多肽 N-端测序技术是以 Edman 化学降解法为基础的， Edman 化学降解，其基本原理是包括通过异硫氰酸苯脂与蛋白质和多肽的 N-端残基的偶联，苯氨基硫甲酰酞（PTC-肽）环化裂解，和噻唑呤酮苯氨（ATZ）转化为苯异硫尿氨基酸（PTH-氨基酸）三个主要的化学步骤，每个循环从蛋白质与多肽裂解一个氨基酸残基，同时暴露出新的游离的氨基酸进行下一个 Edman 降解，最后通过转移的 PTH-氨基酸鉴定实现蛋白质序列的测定。  

二、仪器特点

• 微量分析——Edman分析，具有反应时间短，背景噪音低的特点

• 精确的流量控制和高度的再现性

• 样品流动比极大地提高，10-12摩尔的分析灵敏度

• 恒溶剂组成——比梯度方式更稳定的保留时间，便于控制，流动相可反复使用



反应流程：

             



三、可开展工作

        可提供纯蛋白质N-端氨基酸序列测定(可提供30个以上氨基酸测定, 具体测定氨基酸个数由客户确定),数据的最终提供形式包括色谱图和N-端氨基酸序列。


       对送样的要求:


一、通则

1、注明委托人、地址单位、电话、电子邮件地址。
2、样品信息括：样品编号、样品数量、样品量、浓度、蛋白质或多肽、样品纯度、溶剂种类。
3、样品N端未被封闭，不含干扰物质：去污剂、胺、盐分、氨基酸、非挥发性缓冲液、蛋白酶。
4、样品形式：最好是冻干粉或溶解于纯水的蛋白溶液。
5、样品如被修饰，请详细告知修饰方式。提供样品组织来源及制备方法信息。
6、样品如有特殊理化性质（如膜蛋白，特殊酶活性，特殊结构等），请详细说明。
7、若为已知序列样品，请告知预期序列信息。
8、请务必告知样品表观分子量范围。

二、溶液

1、样品纯度应达到95%以上（HPLC），标明准确纯度。纯度越高，实验结果越理想。
2、样品浓度不低于5 pmol/μl（5 uM）, 体积不少于50μl, 并标明准确浓度。
3、请务必标明样品缓冲液的成份，并保证样品缓冲液中不含蛋白酶。
4、请自留备份，以便交流实验情况。5、若运送路程较长，请将样品置入冰盒内保存，以防止蛋白质降解。

三、检测结果

1、检测内容：纯蛋白质N-端氨基酸序列
2、报告形式：色谱图和N-端氨基酸序列
3、收取样品时间：8：00-17：30 四、已做样品示例样品名称：G9

四、已做样品示例

样品名称：G9
样品信息：蛋白质 // 4℃保存 //预测分子量23KD左右 // 测N端5个AA
测序结果：Pro-Phe-Ile-Thr-Val 序列图如下：


           

                 


                   



                     

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